Metodologie In Virologia 2022/2023

Colture di tessuto e saggi di vitalità cellulare (conta cellulare, saggi MTT e determinazione del CC50)

Infezioni virali: curva di crescita virale, effetti citopatici, concetto di  MOI, infezioni in vitro: single-step e multi-step, infezioni in vivo

Produzione di virus animali su colture di tessuto e su uova embrionate

Titolazioni virali: saggi fisici e per infettività (emoagglutinazione, saggio della diluizione limite e per placche di lisi; calcolo IC50, IC90 e Selectivy Index)

Diagnostica in Virologia: indagini virologiche e sierologiche (test inibizione dell’emoagglutinazione, test neutralizzazione delle placche ed ELISA)

Laboratorio di Virologia Molecolare:

-analisi dei livelli delle proteine virali: Western blot, Immunoprecipitazione, Co-immunoprecipitazione, Immunofluorescenza, Immunoistochimica (IHC), Proximity Ligation Assay (PLA).

-analisi dei livelli degli acidi nucleici virali: PCR, RT-PCR, Northern blot, Southern blot, analisi di interazione con fattori trascrizionali e funzionalità dei promotori: Elettrophoretic Mobility Shift assay (EMSA), Chromatin Immunoprecipitation (ChIP),  saggi CAT e saggi di luciferasi.

Nuovi approcci quantitativi per la determinazione dei livelli degli acidi nucleici virali e principali applicazioni in ambito diagnostico: Real-Time PCR, Multiplex PCR, Amplificazione isotermica loop-mediata (LAMP), Digital PCR.

Disegno di saggi di PCR per l’amplificazione dei genomi virali: dallo studio della conservazione delle sequenze virali all’ottimizzazione delle reazioni di PCR.

Principali softwares e banche dati on line per lo studio delle sequenze virali, l’allineamento dei genomi virali e il disegno dei primers di amplificazione.

Metodologie classiche e di nuova generazione per il sequenziamento dei genomi virali: analisi della variabilità genetica virale, studio delle mutazioni virali associate a farmaco-resistenza e evasione immunitaria, determinazione del genotipo virale attraverso analisi filogenetiche

Ingegneria genetica dei virus:

-utilizzo dei plasmidi di espressione, vettori virali e loro applicazioni (ricerca, terapia genica, terapia antitumorale e vaccini)

-vettori adenovirali e loro applicazioni

- vettori retrovirali e lentivirali e loro applicazioni